在创新药研发和生命科学研究中解析活性化合物的作用机制MOA始终是重要研究内容。对于小分子药物、天然产物以及内源性代谢物来说仅依靠表型筛选虽然能够发现具有活性的候选分子但无法直接确定其作用蛋白。因此进一步开展靶点发现、靶点鉴定和靶点研究明确药物与蛋白之间的直接相互作用对于机制解析、药物优化以及后续功能验证都具有重要意义。近年来随着高通量筛选技术的发展HuProt™20Khumanproteomemicroarray逐渐成为科研人员开展HumanMicroarrayProteomicAnalysis的重要平台。依托蛋白质微阵列技术该平台能够在一次实验中检测两万余种人源蛋白为天然产物靶点筛选、代谢物靶点筛选、化合物靶点鉴定以及药物-蛋白相互作用研究提供系统的数据支持同时帮助科研人员实现以药找靶在开展小分子药物靶点研究过程中真正做到找对工具少走弯路。20K人类蛋白组芯片为什么能够实现高通量筛选HuProt™人类蛋白组芯片v4.0建立在丰富的人类蛋白资源基础上在一张芯片中固定了超过21000种全长人源蛋白覆盖约81%的人类基因组开放阅读框ORF。这些蛋白包括受体、酶类、激酶、转录因子、胞外基质蛋白等30多个类别使20K人类蛋白组芯片能够覆盖大多数常见蛋白类型为不同研究方向提供广泛的筛选范围。为了保持蛋白天然活性美国CDI人类蛋白质芯片采用真核酵母表达体系进行蛋白制备。相比传统原核表达方式真核表达能够完成更加完整的蛋白折叠并保留磷酸化、糖基化等翻译后修饰使固定于芯片上的蛋白更加接近人体内天然状态提高实验数据的可靠性。此外平台采用GST-His6双标签纯化技术对正确折叠蛋白进行富集同时减少错误折叠蛋白造成的干扰使Huprot人类蛋白组芯片具有良好的实验重复性和数据稳定性为开展人类蛋白组芯片检测服务奠定了可靠基础。Humanproteomemicroarrayassays如何完成药物靶点筛选开展Humanproteomemicroarrayassays时实验核心是分析目标分子与蛋白之间是否存在直接结合关系因此整个检测流程围绕分子互作展开。实验开始前需要根据研究对象完成探针设计。目前大多数小分子药物靶点筛选实验都会采用生物素标记靶点蛋白筛选策略将Biotin标签连接到活性小分子为后续荧光检测建立识别基础。完成探针制备后需要对芯片进行封闭处理以降低背景信号及非特异性结合。随后将生物素标记探针加入芯片与固定于芯片上的两万余种蛋白共同孵育使潜在结合蛋白与目标分子充分接触。经过充分孵育后通过连续洗涤去除未结合探针再加入Cy3或Cy5荧光标记链霉亲和素。由于链霉亲和素能够特异识别Biotin因此与目标分子发生结合的蛋白位点即可产生荧光信号。实验结束后利用高分辨率扫描设备获取荧光图像并结合实验组、空白对照、生物素对照以及竞争实验进行综合分析从而筛选得到候选药物筛选靶蛋白为后续验证实验提供参考依据。HumanMicroarrayProteomicAnalysis具有哪些应用优势对于开展靶点发现而言检测平台是否能够反映真实的蛋白结合情况十分重要。与Pull-down、ABPP、DARTS等寻找药物靶点的技术相比HuProt™20Khumanproteomemicroarray采用独立固定蛋白模式每一个检测位点仅对应一种蛋白因此能够更加直接地反映目标化合物与蛋白之间的物理结合关系有助于减少蛋白复合物造成的间接干扰提高化合物靶点鉴定效率。另一方面由于芯片蛋白均经过纯化表达并保持较高浓度因此对于低丰度蛋白、弱结合蛋白以及瞬时结合蛋白具有较好的检测能力在天然产物靶点鉴定技术、天然产物靶点发现技术、代谢物靶点筛选及小分子药物靶标筛选等研究中具有较高的应用价值。对于具有多靶点特点的小分子药物和天然产物而言蛋白质微阵列能够同步获得多个候选结合蛋白信息为建立完整的蛋白互作网络提供基础数据同时也为后续作用机制分析提供更加全面的研究依据。数据分析提升药物机制研究效率在人类蛋白组芯片实验完成后通常采用Z-Score、SNR、I-MeanRatio等指标进行综合评价。在获得候选蛋白之后可结合GO功能富集分析和KEGG通路分析对蛋白参与的生物学过程、分子功能以及疾病相关信号通路进行系统解析从而帮助科研人员更加快速地确定重点研究对象提高整体机制研究效率。由于人类蛋白组芯片检测服务具有高通量、数据重复性较好以及原始数据可持续分析等特点一次实验产生的数据不仅能够满足当前课题研究需求还能够支持多个研究方向开展进一步分析。总结随着药物研发不断向精准机制研究方向发展高通量蛋白筛选平台的重要性不断提升。依托丰富的人类蛋白资源HuProt™人类蛋白组芯片v4.0为科研人员开展靶点发现、靶点垂钓、天然产物单体如何锁定靶点以及小分子药物靶点研究提供了可靠的技术支持。达吉特天然产物靶点发现技术、化合物靶点鉴定以及药物-蛋白相互作用研究服务推动药物机制研究不断深入目前已经助力研究成果频繁登上STTT、MolCancer、J.Hepatol、Gut、Exploration、CellMolImmunol、CircRes、NatCommun、AdvSci、CancerCommun、Theranostics、APSB、MedComm、RedoxBiol、ClinMolHepatol、PNAS等国际学术期刊。达吉特HuProt™20K人类蛋白组芯片服务案例目前已累计501.ChenYJ,ShiRC,XiangYC,etal.Malateinitiatesaproton-sensingpathwayessentialforpHregulationofinflammation.SignalTransductTargetTher.2024;9(1):367.Published2024Dec30.doi:10.1038/s41392-024-02076-9(陆军军医大学附属第一医院)IF40.82.HuM,XuY,WangY,etal.Gutmicrobial-derivedN-acetylmuramicacidalleviatescolorectalcancerviatheAKT1pathway.Gut.PublishedonlineFebruary27,2025.doi:10.1136/gutjnl-2024-332891(南方医科大学珠江医院)IF23.13.ShaoM,ZhangX,SunJ,etal.Saikosaponinb1AttenuatesLiverFibrosisbyBlockingSTAT3/Gli1InteractionandInducingGli1Degradation.Exploration.2766-8509.(浙江中医药大学)IF22.54.XuQ,LiG,ZhangH,etal.ThenaturalflavonoiddihydromyricetintargetssenescentcellsviaPRDX2andalleviatesage-relateddiseases.NatCommun.PublishedonlineMarch6,2026.doi:10.1038/s41467-026-70302-9(上海交通大学医学院)IF15.75.ChenL,WuB,MoL,etal.High-contentscreeningidentifiesganodericacidAasasenotherapeutictopreventcellularsenescenceandextendhealthspaninpreclinicalmodels.NatCommun.2025;16(1):2878.Published2025Mar24.doi:10.1038/s41467-025-58188-5(华中科技大学同济医学院)IF15.76.GuY,ChenY,WeiL,etal.AuthorCorrection:ABHD5inhibitsYAP-inducedc-MetoverexpressionandcoloncancercellstemnessviasuppressingYAPmethylation.NatCommun.2023;14(1):1875.Published2023Apr4.doi:10.1038/s41467-023-37521-w(第三军医大学)IF15.77.ZhongJ,HeX,GaoX,etal.HyodeoxycholicacidamelioratesnonalcoholicfattyliverdiseasebyinhibitingRAN-mediatedPPARαnucleus-cytoplasmshuttling.NatCommun.2023;14(1):5451.Published2023Sep6.doi:10.1038/s41467-023-41061-8(上海中医药大学)IF15.78.ShenSM,JiY,ZhangC,etal.NuclearPTENsafeguardspre-mRNAsplicingtolinkGolgiapparatusforitstumorsuppressiverole.NatCommun.2018;9(1):2392.Published2018Jun19.doi:10.1038/s41467-018-04760-1(上海交通大学)IF15.79.LiD,WeiR,ZhangX,etal.GutcommensalmetaboliterhamnosepromotesmacrophagesphagocytosisbyactivatingSLC12A4andprotectsagainstsepsisinmice.ActaPharmSinB.2024;14(7):3068-3085.doi:10.1016/j.apsb.2024.03.025(南方医科大学)IF14.610.XuX,YanY,ZhengM,etal.EmodinAlleviatesSepsis-InducedMultiorganDamagebyInhibitingNETosisthroughTargetingNeutrophilsBCL-10.AdvSci(Weinh).2025Aug8:e17129.(首都医科大学附属北京中医医院)IF14.111.XuanC,ChenD,ZhangS,etal.IsoquercitrinAlleviatesDiabeticNephropathybyInhibitingSTAT3PhosphorylationandDimerization.AdvSci(Weinh).PublishedonlineApril4,2025.doi:10.1002/advs.202414587(中国人民解放军总医院)IF14.112.CuiJ,ChenY,YangQ,etal.ProtosappaninAProtectsDOX-InducedMyocardialInjuryandCardiacDysfunctionbyTargetingACSL4/FTH1Axis-DependentFerroptosis.AdvSci(Weinh).2024;11(34):e2310227.doi:10.1002/advs.202310227(哈尔滨医科大学附属第二医院)IF14.113.ZhengY,ZhaoL,XiongZ,etal.Ursolicacidtargetssecretedphosphoprotein1toregulateTh17cellsagainstmetabolicdysfunction-associatedsteatoticliverdisease.ClinMolHepatol.2024;30(3):449-467.doi:10.3350/cmh.2024.0047(上海中医药大学联合广州中医药大学)IF1414.ZhouWJ,YangHL,MeiJ,etal.Fructose-1,6-bisphosphatepreventspregnancylossby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